研究證明，銀杏內(nèi)酯注射液能夠抑制家兔中血小板活化因子（PAF）誘導的血小板聚集，抑制血小板活化，且高劑量（1.02 ml/kg）作用最強。銀杏內(nèi)酯注射液的有效成分是白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯ABC，銀杏內(nèi)酯早在1985年就已被發(fā)現(xiàn)是PAF受體的拮抗劑，白果內(nèi)酯具有神經(jīng)血管保護作用，但對PAF拮抗作用報道較少。
本研究旨在觀察銀杏內(nèi)酯注射液、銀杏內(nèi)酯ABC、銀杏葉提取物注射液（EGb761）對血小板活化因子（PAF）誘導的血小板聚集的效果及抑制率比較，研究白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯是否具有協(xié)同抗PAF作用。
材料與方法
將日本大耳兔隨機分為對照（生理鹽水）組、EGb761（1.02 ml/kg）組、銀杏內(nèi)酯ABC（5.13 mg/kg）組、銀杏內(nèi)酯注射液（1.02 ml/kg，以萜內(nèi)酯計5.1 mg/kg）組、白果內(nèi)酯（5.13 mg/kg）組，分別靜脈注射相應藥物，每天給藥1次，連續(xù)給藥7 d。
給藥結(jié)束后，家兔心臟取血，觀察PAF誘導下血小板聚集率；電鏡觀察血小板超微結(jié)構(gòu)；試劑盒法觀察PAF誘導下血清中血小板因子-4（PF-4）和β-血小板球蛋白（β-TG）含量。
結(jié)果
1. 血小板聚集實驗
在PAF誘導下，與對照組比較，EGb761組、銀杏內(nèi)酯ABC組、銀杏內(nèi)酯注射液組的血小板聚集率均顯著降低（P＜0.05、0.01）；而白果內(nèi)酯組與對照組比較無統(tǒng)計學差異。結(jié)果表明，銀杏內(nèi)酯注射液組、銀杏內(nèi)酯ABC和EGb761組均對PAF誘導的血小板聚集產(chǎn)生抑制作用，血小板聚集抑制率：銀杏內(nèi)酯注射液（43.76%）＞銀杏內(nèi)酯ABC（35.3%）＞EGb761（26.52%）＞白果內(nèi)酯（5.48%）。結(jié)果見表1。
2. 血小板電鏡檢測結(jié)果
在2000倍的掃描電鏡下主要觀察到4種血小板形態(tài)：圓形、樹形、展平形和聚集形。在PAF誘導下，EGb761組、銀杏內(nèi)酯注射液組、銀杏內(nèi)酯ABC組的血小板大小較一致，表面光滑，聚集型血小板較少見。對照組和白果內(nèi)酯組紅細胞可粘附在血小板上，血小板形態(tài)不規(guī)律、體積增大、伸出偽足、聚集形血小板數(shù)增多。結(jié)果見圖1。
通過計數(shù)分析，與對照組比較，EGb761、銀杏內(nèi)酯ABC、銀杏內(nèi)酯注射液組圓形、展平形血小板比例顯著增加（P＜0.05、0.01），聚集形顯著降低（P＜0.01），結(jié)果見表2。
3. 血小板PF-4和β-TG檢測結(jié)果
與對照組比較，銀杏內(nèi)酯ABC及銀杏內(nèi)酯注射液組PF-4水平顯著降低（P＜0.01）；EGb761、銀杏內(nèi)酯ABC及銀杏內(nèi)酯注射液β-TG水平也顯著降低（P＜0.01、0.05）。PF-4和β-TG水平降低，說明血小板釋放功能受到抑制。見表3。
討論
動脈粥樣硬化、動脈血栓及其他的心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展都與血小板的活化相關(guān)，因此抗血小板聚集藥物在防治相關(guān)疾病中發(fā)揮著越來越重要的作用。常見的抗血小板途徑有花生四烯酸（AA）、二磷酸腺苷（ADP）和PAF途徑。
AA途徑主要通過抑制環(huán)氧化酶，從而不可逆地抑制血小板血栓A2（TXA2）的合成，代表藥物為阿司匹林；ADP途徑通過改變血小板膜結(jié)構(gòu)，阻斷纖維蛋白原與膜上糖蛋Ⅱb/Ⅲa的相互作用，從而抑制ADP誘發(fā)的血小板聚集，代表藥物為氯吡格雷。阿司匹林和氯吡格雷被多個指南推薦并廣泛用于臨床，但部分患者會發(fā)生抵抗，使藥物效果不明顯且增加卒中嚴重性和梗死面積，這就需要考慮選擇替代藥物或聯(lián)合用藥。
PAF是一種具有生物活性的脂質(zhì)遞質(zhì)，在體內(nèi)有著類似激素的生物活性，它存在于血小板聚集機制的最前端，是不依賴AA和ADP誘導血小板聚集的第三條途徑。早前研究發(fā)現(xiàn)，銀杏內(nèi)酯是PAF的拮抗劑，其中銀杏內(nèi)酯B活性最強。
本實驗發(fā)現(xiàn)，銀杏內(nèi)酯注射液（48%白果內(nèi)酯和51%銀杏內(nèi)酯ABC，以萜類內(nèi)酯計劑量為5.1 mg/kg）通過PAF途徑發(fā)揮抗血小板聚集作用，作用強于銀杏內(nèi)酯ABC（劑量為5.13 mg/kg）及銀杏提取物，從而證明白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯ABC具有協(xié)同增效作用，這與Maerz等結(jié)果一致。協(xié)同作用機制可能是白果內(nèi)酯劑量依賴性地下調(diào)PAF受體mRNA的表達，而不影響PAF乙酰水解酶，從而整體下調(diào)PAF的信號轉(zhuǎn)導作用。
此外本次研究結(jié)果顯示，銀杏內(nèi)酯注射液對PAF誘導后的血小板PF-4和β-TG水平有明顯抑制作用，而EGb761降低β-TG作用不明顯。PF-4和β-TG均存在于血小板α顆粒內(nèi)，當血小板受到刺激被激活時從血小板中釋放出來。β-TG和PF-4同時升高說明血小板被激活的可能性較大。
綜上所述，銀杏內(nèi)酯注射液能顯著抑制PAF誘導的血小板激活，作用強于銀杏內(nèi)酯ABC，可能是白果內(nèi)酯發(fā)揮了協(xié)同增效作用。
文獻來源：
季傳平, 徐露, 李慧琴. 銀杏內(nèi)酯注射液和銀杏內(nèi)酯ABC對血小板活化因子誘導的家兔血小板聚集作用比較[J]. 藥物評價研究, 2018(41): 1174-1178.
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