大家好，這里是專注表觀組學十余年，領跑多組學科研服務的易基因。今天跟大家介紹一下易基因的王牌技術：單細胞及微量樣本DNA甲基化測序(Micro DNA-BS)。
單細胞及微量樣本的DNA甲基化組學研究很大程度上受制于建庫技術。傳統的文庫構建方法或類似于基因組DNA的單細胞擴增技術很難應用到甲基化實驗過程中。易基因建立了一系列微量及單細胞甲基化檢測方法，可對于不同項目需求，個性化提供檢測方案，在全基因組、簡化基因組、靶基因等范圍開展甲基化檢測。
易基因建立的單細胞及微量樣本DNA甲基化測序技術包括：
單細胞全基因組甲基化測序（scWGBS）
單細胞簡化基因組甲基化測序（scXRBS）
微量樣本全基因組甲基化測序（Micro DNA-WGBS）
微量細胞或DNA簡化基因組甲基化測序（Micro DNA-XRBS）
應用方向
單細胞及微量珍稀樣本的甲基化研究主要應用于腫瘤發生機制，癌癥研究，胚胎植入前診斷，胚胎早期發育，生殖細胞重組，干細胞及細胞異質性等研究領域。應用的樣本包括單細胞、微量細胞、微量DNA等。特別適用于難以取得的珍稀樣本和細胞異質性較大的組織樣本。
技術優勢
1）微量細胞或單細胞全基因組甲基化測序（Micro DNA-WGBS）DNA起始量：
單細胞/100-1000個細胞；
1ng基因組DNA；
90%以上基因組CG覆蓋。
2）微量細胞或DNA簡化基因組甲基化測序（Micro DNA-XRBS）DNA起始量：
1ng基因組DNA；
10-20M有效CG位點覆蓋；
20G測序數據量。
技術路線
實驗策略
分析內容
送樣要求
技術指標
經典案例
動物研究（項目文章）
微量細胞樣本Micro DNA-WGBS繪制猴子植入前胚胎發育中的DNA甲基化圖譜
Gao F, et al. De novo DNA methylation during monkey pre-implantation embryogenesis. Cell Res. 2017 Apr;27(4):526-539. pii: cr201725.
背 景：
可能由于技術上的限制，還沒有研究揭示早期胚胎發育過程中的全基因組DNA再甲基化。
方 法：
利用具有超低DNA起始量（100個細胞）的微量細胞全基因組DNA甲基化測序技術（Micro DNA-WGBS）繪制靈長類動物（恒河猴，Macaca mulatta）植入前胚胎發育的全基因組甲基化圖譜。
結論：
本研究使用Micro DNA-WGBS對猴子早期胚胎發育過程的5mC進行單堿基分辨率、高覆蓋率的甲基化分析。分析結果鑒定了發育過程中的全基因組DNA去甲基化和從頭甲基化，特別是在從2細胞到8細胞階段的過渡期間，研究首次全面闡明了DNA甲基化動力學的“興衰”。此外，DNA甲基轉移酶敲降實驗表明，異常的DNA甲基化會影響靈長類動物早期胚胎的正常發育。本研究結果進一步完善了目前關于哺乳動物DNA甲基化重編程的知識體系，并為未來靈長類動物胚胎發育的研究提供了寶貴的數據資源。
人類研究
人類植入前胚胎發育的單細胞DNA甲基化組圖譜
Zhu, P., et al. (2018).Single-cell DNA methylome sequencing of human preimplantation embryos.Nat Genet 50(1)
背 景：
在哺乳動物基因組上，胞嘧啶（主要是CpG二連體中的胞嘧啶）在DNA甲基化酶的催化下會發生甲基化。研究顯示，DNA甲基化對多個生物學過程都至關重要，如基因表達抑制、轉座子轉錄活性調節、X染色體的失活，以及基因組印記的維持等。此前研究顯示在著床前的早期胚胎發育過程中只有大規模的DNA去甲基化。而此次研究數據顯示，精子和卵細胞結合受精之后，在人類早期胚胎大規模DNA去甲基化的同時，也在大量高度特異的DNA從頭加甲基化，這表明在人類早期胚胎第一輪DNA甲基化組重編程過程中，全局的DNA去甲基化'凈結果’實際上是高度有序的大規模DNA去甲基化和局部DNA加甲基化兩種分子過程相互拮抗產生的動態平衡的結果。
方 法：
利用單細胞DNA甲基化組高通量測序方法，首次在單細胞分辨率對人類植入前胚胎發育過程進行了更加深入的分析。
結論：
在這篇文章中，為了進一步在單細胞水平研究DNA甲基化重編程過程的動態特征，利用單細胞全基因組DNA甲基化組高通量測序技術，對人類植入前胚胎發育的各個關鍵階段進行了單細胞、單堿基分辨率的系統研究，主要發現有：
（1）首次發現了人類植入前胚胎發育過程中存在大量特異性的DNA從頭加甲基。
（2）首次發現從二細胞胚胎階段開始父母本基因組上的剩余甲基化水平發生逆轉，在同一個單細胞中母本基因組上的剩余甲基化水平顯著高于父本基因組上的剩余甲基化水平。
（3）首次發現DNA甲基化在早期胚胎卵裂過程中的不對稱分配可以用來追溯同一個胚胎中每個細胞的遺傳譜系。
參考文獻：
①Gao F, et al. De novo DNA methylation during monkey pre-implantation embryogenesis. Cell Res. 2017 Apr;27(4):526-539. pii: cr201725.
②Zhu, P., et al. (2018).Single-cell DNA methylome sequencing of human preimplantation embryos.Nat Genet 50(1).
